Effects of adding glycerol and ethylene glycol associated in espermatic viability parameters in canine semen criopreservation

Abstract

Agentes crioprotetores (ACPs), são substâncias adicionadas no diluente seminal com função de reduzir os danos aos espermatozoides durante a congelação. Porém, esta prática é um processo que acarreta lesões e/ou morte celular que podem inviabilizar a fecundação. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da associação dos ACPS Glicerol (G) e Etilenoglicol (E) junto ao diluente Tris-gema (TG) sobre os parâmetros de integridade e funcionalidade das células espermáticas criopreservadas de cães. . Dez ejaculados de machos caninos foram diluídos em 3 tratamentos:, 5% G (T1), 5% E (T2) e G+E (concentração final de 2,5%+2,5%) (T3). Os ejaculados foram avaliados, prontamente diluídos, envasados em palhetas de 0,25ml e criopreservados em máquina de congelamento seminal. As amostras foram avaliadas pós-descongelamento quanto a motilidade espermática (ME), integridade de acrossoma (IA), integridade de membrana (IM), integridade de DNA (ID), funcionalidade de mitocôndria (FM), taxa de penetração heteróloga com óocitos suínos (TP) e número de espermatozoides/oócitos penetrados (NE). A ME foi avaliada em microscópio óptico e as análises de IA, IM, ID e FM foram avaliadas em microscópio de fluorescência (400X) com corantes fluoróforos específicos para cada análise. A fertilização foi realizada em gota de 750 μl de M2 com HEPES contendo 0,4% de BSA acrescido de 250 μl de sêmen, sendo posteriormente recuperados e corados com Hoescht 33342 (10μg/ml) para então avaliar a TP e o NE em microscópio de fluorescência (400X). Não foi observado diferença estatística entre os tratamentos quanto a ME, IM, ID e FM. Em relação a IA o T2 diferiu (P<0,05) dos tratamentos 1 e 3  (24,8 ± 18,3; 50,2 ± 25,4; 38,1 ± 27,5;  respectivamente). Para a TP os melhores resultados foram do T3 (9,8 ± 9,3) e T2 (8,5±1,51) diferindo estatisticamente do tratamento T1 (1,3±1,3). Na análise do NE o T3 apresentou o melhor resultado (0,9±0,8), apresentando diferença estatística do T1 (0,2±0,2) e do T2 (0,13±0,13). Concluiu-se, portanto, que a associação de glicerol e etilenoglicol é uma alternativa eficaz para criopreservação de sêmen canino